為研究地衣芽孢桿菌HW在30 L罐發(fā)酵后期細胞生長和芽孢形成的限制因素,分析了菌株HW對數生長中期(25 h)與后期(32 h)的轉錄組及代謝組差異。與對數生長中期組相比,對數生長后期糖酵解基因gapA、pfkA、pyK表達量下調65.1%~80.5%;三羧酸循環(huán)基因sucC、sdhB、fumC下調56.8%~80.2%,相應代謝產物檸檬酸、異檸檬酸、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸豐度降低了32.2%~96.3%。糖異生通路基因pckA、gapB上調1.21、1.29 倍。另外,磷壁酸合成基因tagB、tagD、tagO下調54.6%~64.0%,相關代謝物N-乙酰胞壁酸、6-磷酸氨基葡萄糖、尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖的豐度顯著下調35.4%~95.6%。氨基酸代謝相關基因gltA、gltB、gdhA、avtA、serC等下調71.3%~98.8%,而aspB表達上調1.849 倍。pdxT、pdxK表達分別下調64.8%、51.4%。對應代謝物谷氨酸、谷氨酰胺、纈氨酸、天冬氨酸豐度降低20%~56%。另外,芽孢合成相關基因spo0A、spo0F、kinA、kinE等下調51%~81%。同時Spo0A~Spo0P的抑制基因abrB、rapH上調1.439~4.653 倍,芽孢衣合成基因cotE、cotF、cotA、cotY、cotZ、yhcN下調83.1%~91.2%。同時,芽孢皮層四肽亞單位(如賴氨酰天冬氨酰谷氨酰亮氨酸等)和芽孢衣亞單位三肽(如亮氨酰脯氨酰異亮氨酸等)的豐度下調48.6%~77.1%。說明菌株HW發(fā)酵對數期存在能量、磷酸鹽供應不足及氨基酸代謝效率不高的瓶頸。基于此在發(fā)酵20~26 h勻速補料葡萄糖(終添加量3%),發(fā)酵20~22 h勻速補料磷酸鹽(終添加量0.1%)和VB6(50 mg/L),使得生物量峰值(33 h)達到5.11×1010 CFU/mL,比補料前提高44.7%,芽孢數達4.89×1010 CFU/mL,較對照提高60.3%,顯著提高了細胞生長及芽孢的生成效率,實驗結果為地衣芽孢桿菌高芽孢率工業(yè)化生產提供了理論和技術支撐。
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