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—— 中國食品雜志社
目的：探究苦蕎來源類外泌體納米囊泡（tartary buckwheat-derived exosome-like nanovesicles，TELN）對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導的巨噬細胞RAW264.7炎癥反應及極化的調控作用與機制。方法：首先采用尺寸排阻色譜（size exclusion chromatography，SEC）法從苦蕎中提取TELN，并進行表征與鑒定；然后以巨噬細胞RAW264.7為研究模型，通過轉錄組學分析LPS處理組與LPS＋TELN共處理組中巨噬細胞RAW264.7的基因表達差異；通過酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測關鍵炎癥因子白細胞介素（interleukin，IL）-6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-1β、IL-10分泌水平；利用實時定量熒光聚合酶鏈式反應（quantitative polymerase chain reaction，qPCR）檢測炎癥因子mRNA表達水平；同時采用流式細胞術和Western?blot分析TELN對LPS刺激下巨噬細胞RAW264.7極化的影響，初步探究TELN在調控炎癥中的作用和機制。結果：采用SEC法提取的TELN粒徑分布均勻，其平均粒徑為145.8?nm，濃度為（1.305±0.074）×1010?particles/mL；轉錄組分析結果顯示，TELN作用下巨噬細胞衍生趨化因子、泛素化、磷酸化蛋白等顯著上調，同時S100A8等調節(jié)免疫和炎癥的基因表達水平也明顯增加。ELISA結果顯示，TELN處理組細胞上清液中促炎因子IL-6、TNF-α和IL-1β水平分別下降（75.6±0.9）%（P＜0.000?1）、（10.9±0.2）%（P＜0.000?1）和（57.8±6.8）%（P＜0.000?1），同時抗炎因子IL-10水平上升（69.7±4.6）%（P＜0.000?1）；qPCR結果在轉錄水平證實TELN顯著下調IL-6、TNF-α和IL-1β?mRNA表達，上調IL-10?mRNA表達。流式細胞術與Western?blot分析結果一致表明，TELN能夠顯著抑制LPS誘導的M1型極化標志物CD86的表達，但未檢測到CD206蛋白表達，提示TELN未促進M2型極化。結論：TELN通過雙向調控炎癥因子分泌（有效抑制促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β釋放，顯著提升抗炎因子IL-10水平）和抑制巨噬細胞向M1型極化，從而發(fā)揮抗炎作用。其對IL-6表達的抑制效果尤為突出，提示其作用可能與靶向核因子κB等信號通路有關。本研究可為深入解析苦蕎的營養(yǎng)與免疫調節(jié)機制提供新視角。
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