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—— 中國食品雜志社
目的：分析假交替單胞菌（Pseudoalteromonas tetraodonis）來源κ-卡拉膠酶的結構域，構建結構域截短突變體，探究非催化結構域對假交替單胞菌κ-卡拉膠酶的酶學性質與結構的影響。方法：利用大腸桿菌異源表達假交替單胞菌κ-卡拉膠酶WT和僅包含糖苷水解酶催化結構域的κ-卡拉膠酶截短體GH（缺失免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）樣結構域），利用3,5-二硝基水楊酸法研究κ-卡拉膠酶WT和GH的酶學性質，利用分子對接和分子動力學模擬研究酶微觀結構的變化。結果：成功對假交替單胞菌κ-卡拉膠酶WT及其截短體GH進行體外表達，WT和GH的分子質量分別為44.0 kDa和35.0 kDa，均能專一性地酶解κ-卡拉膠底物。酶學性質研究發(fā)現，假交替單胞菌κ-卡拉膠酶的Ig樣結構域不影響酶的底物特異性、最適反應溫度、最適反應pH值和κ-卡拉膠酶解產物的組成，但降低了酶的熱穩(wěn)定性、強酸（pH 4.0）和強堿（pH 11.0）穩(wěn)定性、酶對底物的親和力。酶的分子對接及分子動力學模擬分析結果表明，Ig樣結構域截短后，κ-卡拉膠酶與κ-卡拉膠四糖底物的相互作用增強，酶結構的剛性增強，κ-卡拉膠酶F1、F3和F5指狀區(qū)環(huán)狀結構柔性降低，F2和F6指狀區(qū)β片層結構柔性升高，這些結構的改變可能是截短體GH催化活性和熱穩(wěn)定性提高的原因。結論：本研究解析了假交替單胞菌κ-卡拉膠酶的非催化Ig樣結構域與酶性質的構效關系，可為該酶結構與功能研究及酶的應用提供理論基礎。
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