N81位點(diǎn)突變調(diào)控Ligilactobacillus cholophilus BD7642膽鹽水解酶g1294特異性
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以Ligilactobacillus cholophilus BD7642來(lái)源的膽鹽水解酶（bile salt hydrolase，BSH）g1294為研究對(duì)象，重點(diǎn)探討其活性位點(diǎn)突變對(duì)酶特異性的影響。首先，通過(guò)甘氨酸掃描技術(shù)對(duì)BSH g1294活性中心進(jìn)行系統(tǒng)性突變，并采用平板點(diǎn)樣法評(píng)估突變體酶活性；利用高效液相色譜分析突變體對(duì)6 種膽鹽的水解特異性。針對(duì)關(guān)鍵位點(diǎn)N81位點(diǎn)進(jìn)行飽和突變，結(jié)合分子模擬對(duì)接分析突變體與野生酶的差異。結(jié)果表明，與野生酶相比，部分位點(diǎn)突變導(dǎo)致酶活性消失，N81G和N174G突變體特異性增加，其中N81G水解特異性更優(yōu)。N81位點(diǎn)飽和突變中的多個(gè)突變體酶活性變化明顯，且水解能力各異。分子模擬對(duì)接表明，N81G突變體可通過(guò)減少催化位點(diǎn)Cys2與甘氨膽酸之間的空間位阻獲得水解能力。綜上，N81G突變體具有優(yōu)于野生酶的特異性，且BSH對(duì)膽酸的分子識(shí)別機(jī)制可能并非簡(jiǎn)單的氨基酸識(shí)別，這可為理性設(shè)計(jì)BSH g1294酶工程改造提供新思路。
閱讀量: 222 發(fā)表時(shí)間: 2025-06-10
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