領學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
以Ligilactobacillus cholophilus BD7642來源的膽鹽水解酶（bile salt hydrolase，BSH）g1294為研究對象，重點探討其活性位點突變對酶特異性的影響。首先，通過甘氨酸掃描技術(shù)對BSH g1294活性中心進行系統(tǒng)性突變，并采用平板點樣法評估突變體酶活性；利用高效液相色譜分析突變體對6 種膽鹽的水解特異性。針對關鍵位點N81位點進行飽和突變，結(jié)合分子模擬對接分析突變體與野生酶的差異。結(jié)果表明，與野生酶相比，部分位點突變導致酶活性消失，N81G和N174G突變體特異性增加，其中N81G水解特異性更優(yōu)。N81位點飽和突變中的多個突變體酶活性變化明顯，且水解能力各異。分子模擬對接表明，N81G突變體可通過減少催化位點Cys2與甘氨膽酸之間的空間位阻獲得水解能力。綜上，N81G突變體具有優(yōu)于野生酶的特異性，且BSH對膽酸的分子識別機制可能并非簡單的氨基酸識別，這可為理性設計BSH g1294酶工程改造提供新思路。
電話: 010-87293157
地址: 北京市豐臺區(qū)洋橋70號
版權(quán)所有 @ 2023 中國食品雜志社 京公網(wǎng)安備11010602060050號 京ICP備14033398號-2
