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基于RPA/CRISPR-Cas12a技術(shù)的單核細(xì)胞增生李斯特菌快速檢測方法建立
來源：導(dǎo)入 閱讀量: 285 發(fā)表時間: 2024-02-22
作者: 陳大偉，李兵兵，魏明月，李雙姝，楊鵬飛，劉 靚
關(guān)鍵詞: 單核細(xì)胞增生李斯特菌；重組酶聚合酶擴增；CRISPR-Cas12a；快速檢測
摘要:

建立基于RPA/CRISPR-Cas12a技術(shù)單核細(xì)胞增生李斯特菌的快速檢測方法。選取單增李斯特菌溶菌素毒力基因hly（GeneID：987033），設(shè)計重組酶聚合酶擴增（recombinase polymerase amplification，RPA）引物結(jié)合CRISPR-Cas12a蛋白研制兩步法單增李斯特菌快速檢測試劑盒，并對其靈敏度、特異性以及反應(yīng)速率進(jìn)行分析。結(jié)果表明：該法檢測速率快，30 min內(nèi)可檢出單核細(xì)胞增生李斯特菌，同時具有較高的靈敏度，20 μL體系可檢測到最低0.0015 ng靶標(biāo)核酸。將該試劑盒進(jìn)一步用于檢測人工模擬污染食品三文魚肉片，檢測限可達(dá)10 CFU/mL。本方法檢測30 份實際樣本，結(jié)果均與熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法陽性檢出率一致。RPA/CRISPR-Cas12a技術(shù)是快速檢測食源性單增李斯特菌的可行方法。

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