
提取鴨骨骼肌肌鈣蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制備單克隆抗體,并對抗體性能進(jìn)行 評價。將鴨骨骼肌提取后經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)測定,取凝膠條帶免疫小鼠,融合后經(jīng)篩選獲得分泌抗鴨sTnI的雜交瘤細(xì)胞株,用 酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測抗體效價、亞型及特異性等特性。結(jié)果表明:鴨骨骼肌提取物經(jīng)SDS-PAGE后出現(xiàn)2 條 顏色較深的條帶,取分子質(zhì)量24 kDa條帶用于免疫;篩選后獲得2 株單克隆抗體,其中3E7特異性較好,效價在 1∶1.0×105以上,為IgG1亞型,親和常數(shù)(Ka)為5.9×105 L/mol;免疫印跡結(jié)果顯示,抗體3E7能與鴨骨骼肌提取 物反應(yīng),與牛、羊、雞、魚骨骼肌提取物無明顯反應(yīng)。
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