
建立一種基于Proofman探針(proofreading enzyme-mediated probe cleavage)的梯型熔解溫度等溫擴(kuò)增(ladder-shape melting temperature isothermal amplification,LMTIA)方法檢測肉制品中的豬肉成分。選取豬細(xì)胞核中的特異性基因PRLR為靶基因,設(shè)計LMTIA引物和Proofman探針。通過優(yōu)化反應(yīng)體系,對所建立的方法進(jìn)行特異性、靈敏度和最低檢測限結(jié)果評價。結(jié)果表明:所建立的Proofman-LMTIA方法可在30 min內(nèi)完成檢測;相對于從雞肉、鴨肉、牛肉、羊肉、貓肉、狗肉、玉米淀粉、紅薯淀粉、木薯淀粉、綠豆淀粉、小麥粉中提取的基因組DNA,可特異性檢測豬基因組DNA;檢測靈敏度為1 ng/μL,對人工模擬的混合肉樣中豬肉的最低檢測限為0.1%。所建立的Proofman-LMTIA方法對豬肉成分有較好的特異性,能夠快速、準(zhǔn)確檢測出肉制品中的豬肉成分,可對豬肉摻假進(jìn)行快速檢測。
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