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—— 中國食品雜志社
為了能夠快速準確檢測出市場中摻假牛肉制品，采用TaqMan探針法，建立一種用于快速有效檢測牛肉制品中牛源性成分的熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）方法。選擇GenBank中牛β-actin基因的保守序列，設計并合成特異性引物及TaqMan探針，以構建的pMD-18T-96-beef質粒為標準品，優(yōu)化反應條件。結果表明：重組質粒標準品經(jīng)PCR、測序和酶切鑒定正確，建立的標準曲線Ct值與模板拷貝數(shù)對數(shù)值之間呈良好的線性關系，相關系數(shù)為0.98，斜率為－3.345，敏感度為46.1 copies/μL。特異性實驗表明，用該方法檢測豬肉、羊肉、雞肉、鴨肉、鵝肉等非牛肉制品結果均為陰性。批內重復實驗變異系數(shù)均小于0.98%，批間重復實驗變異系數(shù)均小于0.33%，表明該方法重復性良好。用建立的熒光定量PCR方法與SN/T 2051—2008《食品、化妝品和飼料中牛羊豬源性成分檢測方法實時PCR法》同時對市場上40份牛肉加工品進行檢測，結果顯示，本方法檢測有3份樣品為牛源成分陰性，與SN/T 2051—2008方法檢測結果相同。可見，本實驗建立的熒光定量PCR方法具有特異、敏感、快速的特點，適用于檢測市場中肉類摻假的行為。
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