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—— 中國食品雜志社
為了提高來源于釀酒酵母的煙酰胺核糖激酶1（nicotinamide riboside kinase 1 from Saccharomyces cerevisiae，ScNRK1）的熱穩(wěn)定性，本研究基于計算機輔助技術虛擬篩選出ScNRK1的6 個單點突變體，通過定點突變技術完成6 個單點突變的表達及酶學特性分析，然后挑選出3 個優(yōu)勢突變體進行第2輪的組合突變。結果顯示，經過兩輪突變，獲得了1 個熱穩(wěn)定性和催化活性均顯著提高的突變體T136P/S209A，其最適反應溫度提高至45 ℃，45 ℃條件下的半衰期為48.98 min，是野生型ScNRK1的4.2 倍；其比活力為146.63 IU/mg，是野生型的1.98 倍。本研究基于理性設計的手段，成功獲得了熱穩(wěn)定性和催化活性顯著增強的ScNRK1突變體，有望為通過理性設計提高酶分子的熱穩(wěn)定性提供新思路，為煙酰胺單核苷酸的高效、低成本生產提供新酶源。
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