領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
本研究實現(xiàn)了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇解毒酶DepB在枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）RIK 1285中的異源表達，但DepB較低的發(fā)酵水平限制了其在食品加工和飼料中的應(yīng)用，可采用轉(zhuǎn)錄和翻譯相結(jié)合的策略提高DepB在枯草芽孢桿菌中的表達水平。首先，選擇9 個單啟動子替換原始啟動子P43，其中單啟動子PspoVG介導的重組菌經(jīng)發(fā)酵后酶活力最高，酶活力為29.59 U/mL。其次，選擇4 個具有較高DepB表達水平的啟動子（P43、PsacB、PspoVG和PaprE）構(gòu)建16 個雙啟動子系統(tǒng)，其中，DepB在雙啟動子PaprE-PspoVG的介導下活力達到最高，為48.87 U/mL。此外，通過對啟動子PaprE-PspoVG的核心區(qū)域（-35和-10區(qū)）進行優(yōu)化，Mutant-5酶活力高達69.17 U/mL，是原始菌株（14.45 U/mL）的4.79 倍。在此基礎(chǔ)上，通過優(yōu)化啟動子PspoVG的核糖體結(jié)合位點序列，進一步提高了DepB的表達水平，RBS15酶活力為115.15 U/mL，是原始菌株的7.97 倍。研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄和翻譯相結(jié)合策略是提高重組蛋白發(fā)酵水平的有效手段。
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