領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：構(gòu)建乳酸桿菌的表達(dá)載體，對菌株攜帶的質(zhì)粒進(jìn)行序列測定和功能分析，并利用自身帶有的質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建乳酸桿菌的表達(dá)系統(tǒng)，對乳酸菌口服疫苗的制備起到積極的促進(jìn)作用。方法：從植物乳桿菌LP3中提取質(zhì)粒并進(jìn)行序列測定和功能分析。通過質(zhì)粒pLP3復(fù)制子，與pCPSP載體的氯霉素基因CmR、pUC19的復(fù)制子構(gòu)建大腸桿菌-乳酸菌穿梭質(zhì)粒。在穿梭質(zhì)粒的基礎(chǔ)上加上嗜酸乳桿菌的S層蛋白啟動子PslpA和綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，eGFP）基因，進(jìn)一步構(gòu)建乳酸菌表達(dá)載體D-pLP3-PslpA-eGFP。結(jié)果：從植物乳桿菌LP3中得到一個天然隱蔽性質(zhì)粒pLP3，該質(zhì)粒大小為2 017 bp，GC含量為37.48%。基于質(zhì)粒pLP3，構(gòu)建了大腸桿菌-乳酸菌穿梭質(zhì)粒D-pLP3，并成功轉(zhuǎn)化至不同類型乳酸菌，轉(zhuǎn)化效率介于0.3×102～1.0×103 CFU/μg（DNA質(zhì)量計）之間。乳酸菌表達(dá)載體D-pLP3-PslpA-eGFP轉(zhuǎn)化至植物乳桿菌，成功獲得了熒光蛋白的表達(dá)。結(jié)論：成功構(gòu)建了乳酸菌表達(dá)載體D-pLP3-PslpA，為乳酸菌基因操作提供了新的工具。
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