
為提高Western Blotting結(jié)果的可靠性,以蛋白溶出率和凝膠電泳蛋白條帶完整性為指標(biāo),比較提取液種類、研磨方式、酶抑制劑種類及其體積分?jǐn)?shù)和提取時間對南美白對蝦肝胰腺蛋白提取效果的影響。采用優(yōu)化后的提取方法獲得高質(zhì)量蛋白樣品,并采用Western Blotting法分析無水環(huán)境脅迫后南美白對蝦肝胰腺組織中細(xì)胞凋亡信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明:RIPA裂解液作為提取溶劑所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸鹽緩沖液,電動勻漿和液氮研磨所得蛋白條帶更完整,4%蛋白酶磷酸酶混合抑制劑能有效抑制肝胰腺內(nèi)源酶引起的蛋白降解;采用Western Blotting法分析無水保活期間南美白對蝦肝胰腺蛋白,發(fā)現(xiàn)低溫誘導(dǎo)休眠的同時會引起細(xì)胞輕微凋亡,且凋亡水平呈應(yīng)激時間依賴性增加,環(huán)境脅迫解除后有所回調(diào)。
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