領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
通過基因工程的手段，利用木糖發(fā)酵轉(zhuǎn)化乙醇是近年來研究的熱點。為引入木糖向木酮糖轉(zhuǎn)化的途徑，采 用多重拼接PCR方法將木糖向木酮糖轉(zhuǎn)化有關(guān)的木糖還原酶基因(xyl1)、木糖醇脫氫酶基因(xyl2)與轉(zhuǎn)醛酶基因(tal1) 進(jìn)行拼接后克隆到表達(dá)載體pAUR123中，獲得融合表達(dá)載體pAUR123-X12A；為超表達(dá)下游代謝途徑的基因，將控 制木酮糖向乙醇轉(zhuǎn)化的木酮糖激酶基因(xks1)與轉(zhuǎn)酮酶基因(tkl1)進(jìn)行拼接后克隆到表達(dá)載體pAUR123中，獲得融合 表達(dá)載體pAUR123-SK。通過乙酸鋰電擊轉(zhuǎn)化的方法分別將pAUR123-X12A與pAUR123-SK轉(zhuǎn)入S. cerevisiae INVSc1 中，得到S. cerevisiae INVSc1-X12A與S. cerevisiae INVSc1-SK重組子。對構(gòu)建的重組子進(jìn)行表達(dá)后，經(jīng)聚丙烯酰胺凝 膠電泳(SDS-PAGE)和酶活性分析，目的基因獲得表達(dá)。初步結(jié)果顯示兩株重組菌構(gòu)建成功。
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