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—— 中國食品雜志社
為實現(xiàn)對致病菌銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的快速微量檢測，本研究首先利用全細胞指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進化技術(shù)，篩選靶向銅綠假單胞菌的特異性單鏈DNA（single-stranded DNA，ssDNA）適配體。經(jīng)15 輪富集后共獲得30 個ssDNA序列，比較吉布斯自由能ΔG和解離常數(shù)Kd后，確定適配體Apt13的特異性和親和力最佳，可用于銅綠假單胞菌的檢測。異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標記菌體形成的FITC-P. aeruginosa復(fù)合物具有熒光，適配體Apt13的加入可猝滅其熒光，而反篩菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和溶壁微球菌不影響Apt13對FITC-P. aeruginosa熒光的猝滅作用。基于此現(xiàn)象構(gòu)建了用于銅綠假單胞菌檢測的熒光系統(tǒng)。通過適配體Apt13對待測樣本中熒光的猝滅情況判斷是否存在銅綠假單胞菌。在確定Apt13最佳使用濃度及其與P. aeruginosa孵育的最優(yōu)時間基礎(chǔ)上，Apt13猝滅的熒光強度與銅綠假單胞菌在101～108 CFU/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，檢出限為2 CFU/mL，檢測可在2.0 h內(nèi)完成，并可對水樣中銅綠假單胞菌實現(xiàn)有效檢測。
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