
本研究通過外源添加蛋白激酶A和S-亞硝基谷胱甘肽,分析磷酸化和亞硝基化影響磷酸丙糖異構酶活性隨時間變化的規(guī)律。通過構建不同溫度條件下磷酸丙糖異構酶磷酸化和亞硝基化修飾高表達模型,探究磷酸化和亞硝基化在調(diào)節(jié)磷酸丙糖異構酶活性中的作用。結果表明,4 ℃體外條件下,對照組樣品在孵育6 h的磷酸丙糖異構酶活性、磷酸化水平和亞硝基化水平顯著低于恒溫+修飾組,磷酸化和亞硝基化共同作用提高了磷酸丙糖異構酶活性。與恒溫+修飾組相比,幅度波動+修飾組磷酸化對酶活性的作用減弱,頻率波動+修飾組亞硝基化對酶活性的作用增強。幅度波動+修飾組和頻率波動+修飾組樣品孵育6 h的β-折疊相對含量顯著高于恒溫+修飾組,無規(guī)卷曲相對含量顯著低于恒溫+修飾組。溫度波動延緩磷酸丙糖異構酶結構的解聚。利用原子力顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),3 個處理組孵育12 h的磷酸丙糖異構酶形態(tài)小于0 h,溫度波動不改變磷酸丙糖異構酶的最終解聚形態(tài)。綜上,在4 ℃體外孵育條件下,磷酸化水平和亞硝基化水平的提高延緩了磷酸丙糖異構酶的活性下降,溫度幅度或頻率波動影響磷酸化和亞硝基化對酶活性的調(diào)節(jié)作用,使其在孵育早期的活性提高,抑制其結構從有序向無序轉(zhuǎn)變。
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