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—— 中國食品雜志社
為了研究副溶血性弧菌噬菌體vB_VpP_1裂解酶重組表達(dá)后對副溶血性弧菌的體外裂解作用，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)全基因組測序及功能分析結(jié)果初步判斷噬菌體vB_VpP_1的gp32基因片段為裂解酶基因，使用Expasy等工具分析了gp32的氨基酸序列組成和結(jié)構(gòu)等；使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物后克隆至pET-28a（＋）載體進(jìn)行原核表達(dá)；純化后的裂解酶作用于宿主菌及乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）處理后的宿主菌，測定裂解酶的活性。結(jié)果表明，vB_VpP_1裂解酶的三級結(jié)構(gòu)為球形親水蛋白，預(yù)測含有2 個(gè)催化結(jié)構(gòu)域，符合革蘭氏陰性菌噬菌體裂解酶的基本特征，不存在跨膜區(qū)域及信號肽。純化后的噬菌體vB_VpP_1裂解酶活力約為（1 487±182）U/mg，對已被EDTA破壞細(xì)胞壁外膜的副溶血性弧菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的裂解能力，但不能有效裂解細(xì)胞壁完好的副溶血性弧菌。本研究成功構(gòu)建噬菌體vB_VpP_1裂解酶原核表達(dá)載體，表達(dá)、純化后的裂解酶能夠裂解細(xì)胞壁被破壞的副溶血性弧菌。
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