
采用酶活動(dòng)力學(xué)、聯(lián)合抑制、熒光光譜、等溫滴定量熱法和分子對(duì)接等技術(shù)系統(tǒng)探究?jī)煞N多肽(APAM和RLPA)對(duì)胰脂肪酶(pancreatic lipase,PL)和膽固醇酯酶(cholesterol esterase,CE)活性調(diào)控效果及分子結(jié)合機(jī)制。結(jié)果表明,RLPA對(duì)PL和CE具有更強(qiáng)的抑制活性,其半抑制濃度分別為(79.62±3.20)μmol/L和(301.27±14.40)μmol/L。抑制動(dòng)力學(xué)分析表明APAM對(duì)兩種酶的抑制機(jī)制為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,而RLPA則為混合性抑制。聯(lián)合抑制表明APAM和RLPA在低濃度下均可與奧利司他協(xié)同抑制PL和CE,但在高濃度下協(xié)同作用減弱,甚至出現(xiàn)拮抗現(xiàn)象。熒光光譜結(jié)果表明兩種多肽可以通過與PL和CE發(fā)生結(jié)合產(chǎn)生靜態(tài)猝滅,改變了酶中脂肪族氨基酸的疏水環(huán)境。等溫滴定量熱法證明多肽與酶的結(jié)合過程是自發(fā)且放熱,主要通過氫鍵和靜電相互作用實(shí)現(xiàn)。分子對(duì)接模擬進(jìn)一步分析表明氫鍵、鹽橋和陽離子-π相互作用在多肽與酶的結(jié)合中起著至關(guān)重要的作用。這項(xiàng)研究豐富了對(duì)多肽與PL和CE的相互作用機(jī)制的認(rèn)識(shí),為開發(fā)基于漢麻籽蛋白的功能性食品提供了科學(xué)依據(jù)。
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