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—— 中國食品雜志社
本實驗在大腸桿菌BL21star（DE3）中構建2’-巖藻糖基乳糖（2’-fucosyllactose，2’-FL）的從頭合成途徑，通過CRISPR/Cas9系統(tǒng)敲除β-半乳糖苷酶基因lacZ和UDP-葡萄糖脂質載體轉移酶基因wcaJ，探究不同來源α-1,2-巖藻糖基轉移酶對2’-FL合成的影響，調控合成途徑基因的轉錄水平，并進行工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化。結果表明，初始工程菌搖瓶發(fā)酵72 h后2’-FL產(chǎn)量為0.34 g/L，敲除lacZ和wcaJ基因后發(fā)酵72 h合成的2’-FL質量濃度提高到2.12 g/L。脆弱擬桿菌（Bacteroides fragilis）來源α-1,2-巖藻糖基轉移酶WcfB產(chǎn)量提升效果最好，搖瓶發(fā)酵合成的2’-FL質量濃度達4.12 g/L。經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化，工程菌BLW-2在28 ℃和異丙基-β-D-硫代半乳糖苷終濃度0.2 mmol/L條件下，搖瓶發(fā)酵合成的2’-FL質量濃度提高至5.01 g/L，5 L發(fā)酵罐中分批補料發(fā)酵合成的2’-FL質量濃度達31.2 g/L。
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