領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為了探尋天然原肌球蛋白的可替代物作為診斷和治療蝦類過敏的基礎(chǔ)材料，本研究從河蝦中提取總RNA，利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)克隆河蝦過敏原原肌球蛋白基因的全長序列。以此序列設(shè)計表達(dá)引物，構(gòu)建表達(dá)載體，最后通過異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)重組原肌球蛋白。結(jié)果顯示，河蝦的原肌球蛋白基因cDNA序列全長1 658 bp，開放閱讀框855 bp，編碼284 個氨基酸，預(yù)測蛋白等電點4.70，預(yù)測分子質(zhì)量32.8 kDa。河蝦原肌球蛋白cDNA序列已上傳至GenBank數(shù)據(jù)庫，登錄號為OP974621。本研究成功構(gòu)建河蝦原肌球蛋白重組表達(dá)質(zhì)粒pET-30a-TM，并用IPTG進(jìn)行體外誘導(dǎo)表達(dá)，最佳誘導(dǎo)條件為IPTG濃度1 mmol/L、37 ℃誘導(dǎo)4 h。可溶性分析結(jié)果表明重組原肌球蛋白主要以可溶性形式存在于細(xì)胞破碎液的上清液中，分子質(zhì)量約38 kDa。
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