領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
以含有FMV 35S標(biāo)記基因的大豆轉(zhuǎn)化體MON87705為材料，利用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）和數(shù)字PCR（digital PCR，dPCR）技術(shù)，建立一種轉(zhuǎn)基因作物的定量檢測(cè)方法。通過(guò)real-time PCR法對(duì)擴(kuò)增體系測(cè)試，建立的檢測(cè)方法對(duì)FMV 35S標(biāo)記基因具有高度特異性；利用雙重微滴式dPCR進(jìn)行定量檢測(cè)參數(shù)的測(cè)定，結(jié)果表明：在基因組DNA 0.005～20 ng/μL質(zhì)量濃度范圍，靶標(biāo)基因的測(cè)量拷貝數(shù)與理論拷貝數(shù)具有良好的線性關(guān)系；dPCR方法對(duì)FMV 35S標(biāo)記基因的檢出限可達(dá)到5 copies，定量限為0.1%。利用兩個(gè)dPCR平臺(tái)，對(duì)不同含量的轉(zhuǎn)基因作物的盲樣進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和外源特異性片段的雙重、三重測(cè)定，均獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果，數(shù)據(jù)可靠，再現(xiàn)性良好。因此本研究建立的基于篩選標(biāo)記基因FMV 35S的轉(zhuǎn)基因dPCR定量檢測(cè)方法在滿足轉(zhuǎn)基因成分定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的參數(shù)要求的同時(shí)，能夠進(jìn)一步提高檢測(cè)效率，可為轉(zhuǎn)基因作物成分定量提供一種準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的檢測(cè)技術(shù)。
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