領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：基于多酶恒溫快速擴(kuò)增（multienzyme isothermal rapid amplification，MIRA）與封閉式側(cè)向流層析（lateral flow dipstick，LFD）聯(lián)用技術(shù)，建立肉制品真實(shí)性快速檢測方法，解決實(shí)驗(yàn)室方法不適于基層與現(xiàn)場快檢需求的問題。方法：通過Genbank篩選豬、牛、羊、雞、鴨線粒體基因的特異序列，使用DNAStar Megalign軟件比對(duì)種內(nèi)保守、種間特異的靶片段，依據(jù)MIRA引物探針設(shè)計(jì)原則設(shè)計(jì)靶基因引物探針組，通過陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、空白對(duì)照等方式系統(tǒng)篩選引物探針，確定豬、牛、羊、雞、鴨的專屬性引物探針，并采用反應(yīng)體系、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間篩選，優(yōu)化完善特異性檢測方法。對(duì)方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)考察，包括DNA提取、靈敏度、檢出限、假陽性與假陰性考察等，驗(yàn)證方法的有效性。結(jié)果：使用建立的方法與實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測進(jìn)行比對(duì)分析，方法的平均假陽性率為3.49%、假陰性率為3.54%，符合現(xiàn)場快檢方法的要求。結(jié)論：本研究建立了牛、羊、豬、雞、鴨5 種常見肉類的MIRA-LFD技術(shù)，并證實(shí)了其有效性和可行性，實(shí)現(xiàn)了肉制品真實(shí)性的現(xiàn)場快檢。
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