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火雞源性成分實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)方法ISO標(biāo)準(zhǔn)研制
來源:導(dǎo)入 閱讀量: 145 發(fā)表時(shí)間: 2024-02-20
作者: 潘良文,寧雪,王強(qiáng),蔡一村,許鎮(zhèn)堅(jiān),張晨
關(guān)鍵詞: 火雞;實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);檢測(cè);國際標(biāo)準(zhǔn)化組織
摘要:

選擇火雞染色體Z DNA序列的特異片段作為檢測(cè)靶序列,建立了實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)檢測(cè)方法,該方法種間特異性和種內(nèi)一致性良好。將靶序列克隆到pUC57質(zhì)粒中,通過對(duì)不同稀釋濃度的質(zhì)粒樣品進(jìn)行real-time PCR測(cè)試,該方法絕對(duì)檢測(cè)限為5 拷貝/PCR反應(yīng)。組織國際協(xié)同實(shí)驗(yàn)對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證,方法的假陽性率、假陰性率均為0%,絕對(duì)檢測(cè)限為5 拷貝/PCR反應(yīng)。根據(jù)對(duì)各實(shí)驗(yàn)室不同稀釋濃度的質(zhì)粒樣品的定性測(cè)試結(jié)果對(duì)方法進(jìn)行分析,結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)室間標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.30,低于最大允許值1;在檢出概率為95%的情況下,方法的絕對(duì)檢測(cè)限為3.2 拷貝/PCR反應(yīng),低于最大允許值20 拷貝/PCR反應(yīng)。將該方法提交國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(International Organization for Standardization,ISO),經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)不同的制訂階段投票、征求意見,正式上升為ISO標(biāo)準(zhǔn)(ISO/TS 20224-8:2022)。

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