領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
通過(guò)共表達(dá)分子伴侶二硫鍵異構(gòu)酶（protein disulfide isomerase，PDI）和畢赤酵母轉(zhuǎn)錄因子Aft1，提高重組人溶菌酶（human lysozyme，HLY）在畢赤酵母中的分泌表達(dá)水平。將構(gòu)建的分子伴侶表達(dá)載體pG418-PDI和畢赤酵母轉(zhuǎn)錄因子Aft1表達(dá)載體pG418-Aft1線性化后，電擊轉(zhuǎn)化重組畢赤酵母KM71-HLY細(xì)胞，用含G418的平板篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，得到共表達(dá)分子伴侶PDI和HLY，及共表達(dá)畢赤酵母轉(zhuǎn)錄因子Aft1和HLY的工程菌株KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1。搖瓶發(fā)酵分析共表達(dá)PDI和Aft1對(duì)HLY表達(dá)水平的影響。結(jié)果表明，工程菌KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1經(jīng)甲醇誘導(dǎo)均產(chǎn)生14.7 kDa HLY，發(fā)酵上清液在含溶壁微球菌平板上出現(xiàn)抑菌圈。在誘導(dǎo)表達(dá)前期，KM71-HLY-pG418-PDI、KM71-HLY-pG418-Aft1和KM71-HLY生長(zhǎng)量無(wú)明顯差別；70 h后，KM71-HLY-pG418-PDI菌株和KM71-HLY-pG418-Aft1菌株生物量少于KM71-HLY，發(fā)酵最終生長(zhǎng)量分別為KM71-HLY的92.8%與84.1%。KM71-HLY、KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1經(jīng)168 h甲醇誘導(dǎo)，胞外分泌總蛋白量分別為324.02、350.87 mg/L和474.8 mg/L，發(fā)酵液酶活力分別為34 880、45 600 U/mL和50 180 U/mL。與KM71-HLY相比，KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1發(fā)酵產(chǎn)胞外總蛋白分別增加了8.3%和46.5%；KM71-HLY-pG418-PDI和KM71-HLY-pG418-Aft1所產(chǎn)胞外溶菌酶總酶活力較KM71-HLY分別增加了30.7%和43.9%。
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