
目的:確定黃粉蟲抗菌肽的最佳酶解工藝。方法:以黃粉蟲為原料,堿提酸沉法提取黃粉蟲蛋白質(zhì),再利用篩選出的蛋白酶進行水解,并用瓊脂平板擴散法(打孔法)表征制得抗菌肽的抑菌活性。在單因素試驗的基礎(chǔ)上,應(yīng)用Box-Behnken中心組合試驗設(shè)計和響應(yīng)面(RSM)分析法,探討酶解溫度、pH值、酶解時間、加酶量及底物質(zhì)量濃度對酶解產(chǎn)物抑菌活性的影響。結(jié)果:堿性蛋白酶最適合水解黃粉蟲蛋白制備抗菌肽,其最佳工藝條件為:底物質(zhì)量濃度810g/100mL、酶解時間4.4h、加酶量440U/g pro、酶解溫度54℃、pH9.5;酶解物抑菌圈大小理論預(yù)測值為15.17mm,實際測量值為15.04mm。結(jié)論:堿性蛋白酶水解黃粉蟲蛋白能夠得到抑菌活性較強的酶解物,優(yōu)化的工藝條件與理論預(yù)測擬合程度較高。
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