領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
利用磷脂酶C能夠分解卵黃中的卵磷脂而在卵黃LB瓊脂平板上產(chǎn)生乳白色暈圈，從本實(shí)驗(yàn)室微生物菌種庫(kù)600株細(xì)菌中篩選出一株高產(chǎn)磷脂酶C(PLC)蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus 12，以其染色體為模板擴(kuò)增得到磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C(PC-PLC)編碼基因pcplc1，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-pcplc1，并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入受體菌E. coli BL21(DE3)中，用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE分析顯示：重組蛋白以可溶性蛋白的形式存在于細(xì)胞破碎上清，分子質(zhì)量約33kD，與預(yù)期蛋白大小一致。重組蛋白在硼砂卵黃平板上顯現(xiàn)明顯的乳白色暈圈，證明重組蛋白具有磷脂酶C活性，重組大腸桿菌構(gòu)建成功。通過(guò)改變培養(yǎng)溫度、IPTG誘導(dǎo)劑濃度及誘導(dǎo)時(shí)間等單因素試驗(yàn)初步優(yōu)化得到搖瓶培養(yǎng)最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為：轉(zhuǎn)接量4%、最佳誘導(dǎo)時(shí)機(jī)1.5h、最佳IPTG終濃度為0.2mmol/L，25℃誘導(dǎo)培養(yǎng)4h，最佳誘導(dǎo)條件下重組蛋白全部以可溶性蛋白形式存在，破碎上清酶活力達(dá)到(30.24±0.18)U/mL。
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