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—— 中國食品雜志社
為獲得異亮氨酸生產(chǎn)菌谷氨酸棒狀桿菌（Corynebacterium glutamicum）YILW的理性改造策略，考察該菌株與出發(fā)菌株C. glutamicum ATCC 13032異亮氨酸合成途徑中關(guān)鍵酶及代謝產(chǎn)物的差異。結(jié)果表明，C. glutamicumYILW丙酮酸羧化酶編碼基因pyc的下調(diào)表達使得其胞內(nèi)草酰乙酸含量降低，過表達該基因顯著增加胞內(nèi)草酰乙酸含量及異亮氨酸產(chǎn)量（分別從1.32 μmol/g（細胞干質(zhì)量，下同）和5.18 g/L提高至3.32 μmol/g和5.81 g/L），但副產(chǎn)物賴氨酸及胞內(nèi)2-酮丁酸積累量提高。針對該問題采用強啟動子替換手段過表達ilvBNC操縱子，使得其異亮氨酸產(chǎn)量提高至6.63 g/L。為進一步增加異亮氨酸合成，過表達輸出載體編碼基因brnE和brnF，其產(chǎn)量提高至7.31 g/L，較出發(fā)菌株C. glutamicum YILW提高41.1%，轉(zhuǎn)化率提高40.0%。由此可見，在基因轉(zhuǎn)錄及代謝物分析結(jié)果指導(dǎo)下理性過表達pyc、ilvBNC操縱子及brnE和brnF能夠顯著提高異亮氨酸產(chǎn)量并降低副產(chǎn)物濃度。
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