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基于尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶為負向篩選標記的生酮古龍酸桿菌基因組無痕修飾系統(tǒng)的構(gòu)建
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 131 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 陸 浩，李天明，劉金雷，杜紅燕，王北辰，馮惠勇
關(guān)鍵詞: 生酮古龍酸桿菌|負向篩選標記|無痕改造|5-氟尿嘧啶
摘要:

通過構(gòu)建尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因（upp）敲除打靶質(zhì)粒，采用同源重組的方法獲得了生酮古龍酸桿菌（Ketogulonigenium vulgare）的upp基因缺失突變株K. vulgare Δupp，可作為基因組無痕修飾系統(tǒng)底盤細胞的upp基因表達載體，轉(zhuǎn)化突變株K. vulgare Δupp，獲得upp基因回補菌株P(guān)BB-upp，并驗證了upp作為負向篩選標記的可行性。實驗結(jié)果表明：突變株Δupp在1 mg/mL的5-氟尿嘧啶培養(yǎng)基上可生長，野生型和回補菌株P(guān)BB-upp不能生長，3株菌對5-氟尿嘧啶的抗性存在顯著差異，說明可以將upp基因作為負向篩選標記，與正向篩選標記相結(jié)合，在upp基因缺失的底盤細胞基礎(chǔ)上通過兩次同源重組，實現(xiàn)基因組的無痕修飾與改造。

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