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草甘膦人工抗原的制備及兔源多抗的ELISA鑒定
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 134 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 王 晶,王 耀,王方雨,鄧瑞廣,胡驍飛,余秋穎,郝俊芳,邢云瑞,侯玉澤
關(guān)鍵詞: 草甘膦|人工抗原|多抗|酶聯(lián)免疫吸附檢測
摘要:

采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimidehydrochloride,EDC)法和戊二醛(glutaraldehyde,GA)法,合成了草甘膦(N-(phosphonomethyl) glycine,PMG)人工抗原,通過免疫制備高敏感性、特異性的兔PMG多克隆抗血清并進(jìn)行鑒定。將PMG分別與牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和雞卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶聯(lián),合成免疫抗原PMG-BSA和包被抗原PMG-OVA。經(jīng)紫外掃描、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定后,免疫新西蘭大白兔,制備多抗。利用間接酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法測定多抗效價(jià),間接競爭ELISA方法測定血清的敏感性和特異性。結(jié)果表明,免疫的3 只兔血清效價(jià)均達(dá)1∶104以上,2號兔多抗效果最好,半數(shù)抑制濃度(IC50)為30.9 μg/mL,且具備良好的特異性。本實(shí)驗(yàn)成功合成了PMG人工抗原,并制得了敏感性高、特異性好的兔多抗,為PMG的免疫學(xué)快速檢測方法的提供參考。

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