領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為建立納豆芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌融合子快速鑒定的多重聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）方法，根據(jù)芽孢桿菌的芽孢形成早期因子基因spo0A和13 株乳酸菌β-半乳糖苷酶基因的保守序列分別設(shè)計引物對P1/P2和P3/P4，以親本菌株DNA為模板，優(yōu)化每對引物在適宜退火溫度條件下的PCR體系，在最優(yōu)體系下的特異性分析結(jié)果表明P1/P2能特異性擴增出spo0A基因片段（308 bp），而7 株乳酸菌全部呈陰性；P3/P4可擴增出所有受試乳酸菌和經(jīng)表型鑒定確定的陽性融合子中的目標基因片段（576 bp），而對芽孢桿菌無擴增。多重PCR結(jié)果表明在P1/P2的最優(yōu)體系中只有308 bp片段的擴增，而在P3/P4的最優(yōu)體系中可實現(xiàn)2 個片段的共擴增，對融合后獲得的50 個菌株的鑒定結(jié)果與單重PCR和表型鑒定結(jié)果100%吻合。該體系中模板DNA 1 ng/μL，每條引物0.4 μmol/L，脫氧核糖核苷三磷酸0.25 mmol/L，Taq酶0.06 U/μL；PCR時94 ℃預變性5 min；每個循環(huán)（共30 個）94 ℃ 30 s、53 ℃ 30 s、72 ℃ 60 s，產(chǎn)物末端 72 ℃延伸7 min。該方法簡便、快速、特異性好，適用于芽孢桿菌、乳酸菌以及二者融合子的快速鑒定。
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