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—— 中國(guó)食品雜志社
基于脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的J774A.1巨噬細(xì)胞炎癥模型，探究榆干離褶傘溶栓酶（Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme，LUFE）的抗炎作用。將J774A.1細(xì)胞分為正常對(duì)照組、LPS組以及LPS＋LUFE低和高劑量組（LPS＋LUFE-L組、LPS＋LUFE-H組）。LPS＋LUFE-L組和LPS＋LUFE-H組細(xì)胞先以10、20 μg/mL的LUFE培養(yǎng)24 h后，除正常對(duì)照組以外的其余各組均以1 μg/mL的LPS處理24 h。酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液的單核細(xì)胞趨化蛋白-1 （monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）水平；細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞趨化能力；細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞黏附功能；中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞吞噬能力；免疫熒光染色觀察細(xì)胞活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；比色法檢測(cè)細(xì)胞丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、過氧化氫酶（catalase，CAT）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性。蛋白免疫印跡方法測(cè)定Toll樣受體4（toll-like receptor 4，TLR4）及核因子相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor，Nrf2）通路相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明，LUFE干預(yù)后能夠降低IL-6、IL-1β、MCP-1、ROS、MDA水平，抑制LPS所致巨噬細(xì)胞的趨化、黏附及吞噬功能的提高，增強(qiáng)細(xì)胞SOD、CAT活性。同時(shí)，下調(diào)TLR4、髓樣分化因子88（myeloid differentiation primary response protein 88，MyD88）、Kelch樣ECH關(guān)聯(lián)蛋白1及核因子κB蛋白表達(dá)及活化水平；上調(diào)Nrf2、血紅素加氧酶1、NADPH醌氧化還原酶1水平。綜上，LUFE可通過調(diào)控Nrf2及TLR4/MyD88信號(hào)通路抑制脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
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