領(lǐng)學術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：探究紅米稻過氧化物還原酶OsPrx3基因原核細胞表達產(chǎn)物體外抑制DNA氧化損傷的功能。方法：分子重組構(gòu)建大紅谷OsPrx3基因及其定點突變體OsPrx3mC51A的原核表達載體，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌表達目的蛋白，體外鑒定其羥自由基清除活性；采用超螺旋形態(tài)（supercoiled form，SF）pMD18質(zhì)粒為底物進行DNA缺刻實驗，鑒定OsPrx3抑制DNA氧化損傷的功能。結(jié)果：成功在大腸桿菌細胞中表達紅米稻OsPrx3；當OsPrx3質(zhì)量濃度1.0 mg/mL、反應(yīng)2 h時對羥自由基清除率為40%；構(gòu)建目的基因OsPrx3定點突變體，通過測定羥自由基清除率發(fā)現(xiàn)OsPrx3mC51A近100%失活，證實第51位半胱氨酸殘基是該酶參與過氧化反應(yīng)的關(guān)鍵位點；以0.06 μg/μL pMD18質(zhì)粒進行DNA缺刻實驗，結(jié)果顯示OsPrx3在相對較低質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（0.06～0.18 μg/μL）對目標DNA氧化損傷的抑制效應(yīng)具有明顯的量效關(guān)系，此范圍內(nèi)0.18 μg/μL OsPrx3的氧化損傷抑制率最高（88.9%），為最小酶質(zhì)量濃度作用效應(yīng)的1.7 倍；OsPrx3的最適反應(yīng)質(zhì)量濃度為0.15 μg/μL，此條件下抑制質(zhì)粒DNA氧化損傷的效率為77.5%；若設(shè)定SF-DNA/缺刻形態(tài)DNA比值達1.0為氧化還原平衡點，則最適質(zhì)量濃度作用下OsPrx3的較高抑制效應(yīng)至少可維持180 min，并且此時體系中2 種DNA比值仍達1.5。以上結(jié)果表明，紅米稻過氧化物還原酶OsPrx3原核表達產(chǎn)物體外具有較強抑制DNA氧化損傷的功能，本研究可為發(fā)現(xiàn)和運用紅米稻有益蛋白資源提供理論依據(jù)。
2023年第44卷 2022年第43卷 2021年第42卷 2020年第41卷 2019年第40卷 2018年第39卷 2017年第38卷 2016年第37卷 2015年第36卷 2014年第35卷 2013年第34卷 2012年第33卷 2011年第32卷 2010年第31卷 2009年第30卷 2008年第29卷 2007年第28卷 2006年第27卷 2005年第26卷 2004年第25卷 2003年第24卷 2002年第23卷 2001年第22卷 2000年第21卷 1999年第20卷 1998年第19卷 1997年第18卷 1996年第17卷 1995年第16卷 1994年第15卷 1993年第14卷 1992年第13卷 1991年第12卷 1990年第11卷 1989年第10卷 1988年第09卷 1987年第08卷 1986年第07卷 1985年第06卷 1984年第05卷 1983年第04卷 1982年第03卷 1981年第02卷 1980年第01卷
電話: 010-87293157
地址: 北京市豐臺區(qū)洋橋70號
版權(quán)所有 @ 2023 中國食品雜志社 京公網(wǎng)安備11010602060050號 京ICP備14033398號-2
