領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
建立一種可對葡萄汁中大腸桿菌O157（Escherichia coli O157）直接檢測的水凝膠數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增技術(shù)（polymerase chain reaction，PCR）。該方法直接將樣本與水凝膠PCR體系混合，通過熱裂解釋放細(xì)菌DNA，利用水凝膠材料的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)靶標(biāo)DNA的原位數(shù)字PCR擴增，擴增后形成的熒光信號以熒光點形式呈現(xiàn)，熒光點數(shù)量與DNA分子數(shù)量一一對應(yīng)，從而實現(xiàn)精確定量分析。針對大腸桿菌O157設(shè)計PCR引物，建立方法體系，并進(jìn)行可行性、靈敏性、特異性及真實樣品實驗。結(jié)果表明，該方法靈敏度高，檢測限可低至單細(xì)菌水平，無需DNA提取純化；特異性強，只檢出目標(biāo)細(xì)菌；無需樣品前處理，并具有良好的抗抑制效果；從制樣到結(jié)果報告的檢測時間可降至40 min以內(nèi)。所有葡萄汁污染樣品均可直接檢測，陽性檢出率為100%，與稀釋涂布平板方法檢測結(jié)果一致，平均回收率為96.9%～112.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6%～12.4%。本檢測方法具有快速、靈敏、無需樣品前處理和操作簡單等優(yōu)點，適合于現(xiàn)場檢測。
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