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微滴式數(shù)字PCR技術(shù)定量檢測發(fā)酵乳中醋化醋桿菌
來源:導(dǎo)入 閱讀量: 209 發(fā)表時(shí)間: 2024-02-22
作者: 張雅倫, 王贊, 張瑞, 陳勃旭, 周巍, 張巖
關(guān)鍵詞: 微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù);發(fā)酵乳;醋化醋桿菌;定量檢測
摘要:

建立一種微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量檢測發(fā)酵乳中醋化醋桿菌的技術(shù)。根據(jù)醋化醋桿菌ITS基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針,通過反應(yīng)溫度篩選優(yōu)化ddPCR擴(kuò)增條件,通過多種菌株擴(kuò)增驗(yàn)證方法特異性,通過人工添加醋化醋桿菌驗(yàn)證方法檢出限,通過ddPCR法實(shí)測結(jié)果和計(jì)數(shù)法測定結(jié)果之間的比較對其絕對定量進(jìn)行系統(tǒng)性研究。結(jié)果表明:建立的發(fā)酵乳中醋化醋桿菌ddPCR定量檢測方法,反應(yīng)條件中最適退火溫度為54.6?℃,方法特異性強(qiáng),檢出限為7.2×101?CFU/mL,靈敏度高,定量偏差率為23.73%。該方法可以滿足發(fā)酵乳中醋化醋桿菌定量檢測需求。

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