領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
采用重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（recombinase polymerase amplification，RPA），開發(fā)產(chǎn)志賀毒素大腸埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli，STEC）的等溫檢測方法，結(jié)合圓盤式微流控芯片快速檢測目標(biāo)微生物。以stx1和stx2基因?yàn)榘悬c(diǎn)，設(shè)計和篩選適宜的RPA檢測引物和探針序列，驗(yàn)證了19 株STEC菌株（含9 種stx基因亞型）和21 株非STEC菌株，并采用人工污染的牛肉樣品對集成化的微流控芯片進(jìn)行評價。篩選出檢測stx1和stx2基因的高特異性引物、探針組合，與美國農(nóng)業(yè)部微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)指南中STEC定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）方法相比，目標(biāo)基因檢測的包容性和排他性均為100%。熒光RPA微流控芯片法在20 min內(nèi)可同時進(jìn)行32 個反應(yīng)，可檢測STEC菌體靈敏度為9.5×103 CFU/mL。根據(jù)GB 4789.6—2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》的規(guī)定經(jīng)增菌培養(yǎng)后在人工污染牛肉樣品中可檢測1 CFU/25 g的STEC污染，方法的相對正確度和相對檢出水平均為100%。本研究開發(fā)了一種熒光RPA微流控芯片檢測方法，可檢測常見stx基因亞型STEC菌株，操作簡單、反應(yīng)速度快，適用于STEC的高通量快速檢測。
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