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—— 中國食品雜志社
為提高常規(guī)稀釋復性方法的復性效率，以重組綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)包涵體為模型，開發(fā)一種新的雙變性- 稀釋復性方法。新方法選取含有精氨酸的堿性復合溶液作為第一變性劑溶解GFP 包涵體，通過梯度降低變性液的酸堿度析出溶解目的蛋白，再以尿素為第二變性劑溶解析出的蛋白，隨后進行稀釋復性。結(jié)果顯示：與常規(guī)方法比，新方法復性的綠色熒光蛋白活性收率提高至1.5～2.3 倍，復性蛋白對溫度、溶液酸堿度及變性劑的穩(wěn)定性提高。增強型綠色熒光蛋白(enhanced GFP，EGFP)及其融合蛋白的包涵體采用新方法進行復性，均取得80% 以上的活性回收率，說明新方法對GFP 系列融合蛋白的包涵體具有一定的適用性。新方法從變性劑使用與包涵體結(jié)構(gòu)的關(guān)系出發(fā)，突破常規(guī)操作中變性劑單次使用的局限，既保留了簡便性又提高了常規(guī)稀釋復性方法的效率。
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