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副溶血弧菌的SYBR GreenⅠ實時定量PCR檢測方法建立
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 141 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 張曉君,陳 麗,畢可然,秦 蕾,秦國民
關鍵詞: 副溶血弧菌|gyrB基因|SYBR GreenⅠ|實時定量聚合酶鏈式反應
摘要:

基于副溶血弧菌gyrB基因保守序列設計1對特異性引物,建立SYBR GreenⅠ實時定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)檢測副溶血弧菌的方法。SYBR GreenⅠ實時定量PCR的Tm為90℃,擴增產(chǎn)物的熔解曲線只出現(xiàn)1個單特異峰,無引物二聚體,表明該引物具有較好的特異性;所制作的實時定量PCR擴增標準曲線在2.06×108~2.06×103拷貝數(shù)之間有較好的線性關系,相關系數(shù)為0.992,能對副溶血弧進行準確的定量分析。該方法檢測時間從核酸抽提到結(jié)果分析僅需4~5h,且較傳統(tǒng)方法敏感、操作簡單,可用于針對副溶血弧菌的進出口檢驗檢疫、食品安全檢測及該菌引起的水產(chǎn)動物疾病的診斷與分子流行病學調(diào)查。

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