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實時熒光定量PCR法測定發(fā)酵乳中雙歧桿菌
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 170 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 吳燕濤，劉曉莉，曹 悅，王立平
關(guān)鍵詞: 發(fā)酵乳；雙歧桿菌；實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)
摘要:

對實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測發(fā)酵乳中雙歧桿菌的DNA提取方法、PCR擴增效率、標準曲線繪制進行探討，通過比較分析堿式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3種提取方法對發(fā)酵乳中總DNA提取效率、4種不同參考菌株的PCR擴增效率以及單一菌株標準曲線與混合菌株標準曲線的計數(shù)結(jié)果，建立實時熒光定量PCR快速測定發(fā)酵乳制品中雙歧桿菌數(shù)量方法。結(jié)果表明：酶解法提取發(fā)酵乳中總DNA效果最好，OD260/280比值基本接近1.80，且提取的質(zhì)量濃度含量最高；不同菌株的PCR擴增效率不同，其中參考菌株1.2213的Ct值與其他3菌株的Ct值存在顯著性差異；根據(jù)單一菌株繪制標準曲線與混合菌株繪制標準曲線計數(shù)結(jié)果無顯著性差異，后者計數(shù)結(jié)果更客觀、準確。采用酶解法獲取樣品中的菌體細胞，基于混合菌液繪制標準曲線，采用實時熒光定量PCR技術(shù)確定發(fā)酵乳中雙歧桿菌種屬數(shù)量，可快速、準確地測定發(fā)酵乳中雙歧桿菌的數(shù)量。

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