領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：利用篩選出的一株能產(chǎn)D-阿拉伯糖異構(gòu)酶(D-AI)的耐熱菌株，將D-半乳糖轉(zhuǎn)化為D-塔格糖。方法：從實驗室保藏的菌株中篩選出一個產(chǎn)D-阿拉伯糖異構(gòu)酶能力較強的蒼白芽孢桿菌，將該菌株中的D-阿拉伯糖異構(gòu)酶基因D-AI克隆到載體pET-28a上，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中表達。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)，重組菌株能表達出大量可溶性蛋白。結(jié)果：D-阿拉伯糖異構(gòu)酶純化酶的最適反應(yīng)pH值和溫度分別是7.0和60℃，在pH6.0～8.0范圍和30～70℃范圍內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性。加入Mn2+、Zn2+、Fe2+、Ca2+和Ba2+均能夠使D-塔格糖的轉(zhuǎn)化率提高，而Mg2+和Cu2+則對酶活力產(chǎn)生不同程度的抑制。結(jié)果表明：底物質(zhì)量濃度為18g/L的D-半乳糖(含5mmol/L Mn2+)，加入到pH值為7.0的重組細胞粗酶液中，在60℃條件下反應(yīng)12h，可達到最高轉(zhuǎn)化率為41.6%。結(jié)論：這表明具有生物活性的重組D-AI在大腸桿菌E.coli(BL21)中成功表達且具備工業(yè)化生產(chǎn)D-塔格糖的潛能。
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