領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
用PCR方法以Ⅵ型膠原蛋白基因組DNA為模板，獲得Ⅵ型膠原蛋白α2鏈基因，并將該基因插入到表達(dá)載體pPIC9K，對(duì)重組質(zhì)粒pPIC9K-COL6A2所含的目的片段進(jìn)行雙向測(cè)序。將測(cè)序正確的重組質(zhì)粒用限制性?xún)?nèi)切酶SalⅠ線性化，經(jīng)電擊轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞中。通過(guò)MM/MD法進(jìn)行甲醇利用表型的篩選，PCR鑒定目的基因的整合及G418梯度篩選高拷貝轉(zhuǎn)化菌。在酵母α-Factor及AOX1基因啟動(dòng)子和終止信號(hào)的調(diào)控下，目的蛋白分泌表達(dá)到胞外。1%甲醇誘導(dǎo)72h的發(fā)酵液，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定該重組蛋白分子質(zhì)量約為32kD。
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