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—— 中國食品雜志社
乳酸脫氫酶(LDH)是干酪乳酸菌(L.casei)合成L-乳酸途徑中的關(guān)鍵酶，通過構(gòu)建過量表達(dá)乳酸脫氫酶的重組干酪乳桿菌，提高干酪乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)乳酸的能力。根據(jù)干酪乳桿菌乳酸脫氫酶的基因序列設(shè)計引物，PCR擴(kuò)增獲得乳酸脫氫酶基因(ldh)，將其連接到乳酸桿菌穿梭質(zhì)粒pMG36e，構(gòu)建重組質(zhì)粒pMG-ldh，電轉(zhuǎn)入L.casei，利用紅霉素MRS平板篩選陽性克隆，獲得表達(dá)乳酸脫氫酶的重組菌L.casei pMG-ldh，SDS-PAGE和酶活分析結(jié)果表明成功表達(dá)了一個約37kD的乳酸脫氫酶蛋白，重組酶活力最高達(dá)95U/mL，較原始菌23U/mL提高了近3.1倍。為進(jìn)一步提高其產(chǎn)乳酸能力，添加4mmol/L激活劑FBP和8mg/L煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)前體物煙酸，結(jié)果表明：重組菌L.caseipMG-ldh乳酸積累128.2g/L，生產(chǎn)強(qiáng)度達(dá)到3.04g/(L.h)，較原始菌株L.casei分別提高了35%和53%，發(fā)酵周期縮短6h。
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