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—— 中國食品雜志社
以角蛋白酶基因為研究對象，構建畢赤酵母(Pichia pastoris)穩(wěn)定的高效表達系統(tǒng)。采用PCR方法從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)B-3中克隆得到角蛋白酶基因kerC，將其構建在畢赤酵母表達載體pPICZαA上，得到重組質粒pPICZαA-kerC，轉入畢赤酵母X-33中，成功實現(xiàn)了角蛋白酶基因kerC在真核表達系統(tǒng)中的高效表達。重組菌株以體積分數(shù)1%的甲醇誘導培養(yǎng)108h后，酶活力可達32.31U/mL，提高了11.15倍。重組酶最適溫度為60℃，最適pH值為7.5，反應體系中3mmol/L的Co2+、Fe2+和Ca2+能明顯增強其酶活力。SDS-PAGE檢測表明，重組酶分子質量約為31kD。
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