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重金屬鎘單克隆抗體的制備與性質(zhì)分析
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 135 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 易翠平,蘇 芳,陳永發(fā),彭新凱,朱向榮
關(guān)鍵詞: 鎘;抗原;雜交瘤細(xì)胞;單克隆抗體;酶聯(lián)免疫吸附法
摘要:

通過(guò)雙功能螯合劑iEDTA螯合Cd2+并偶聯(lián)卵白蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA),合成免疫抗原Cd-iEDTAOVA和篩選抗原Cd-iEDTA-BSA;以Cd-iEDTA-OVA注射BALB/c小鼠,制備Cd2+單克隆抗體,以Cd-iEDTA-BSA通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行篩選,并分析抗體性質(zhì)。結(jié)果表明:以Cd2+和OVA含量分別為174.6230μg/L、1.7892mg/mL的Cd-iEDTA-OVA抗原免疫小鼠,Cd2+和BSA含量分別為48.1881μg/L、1.8065mg/mL的Cd-iEDTA-BSA抗原篩選,可獲得7F4和7E8兩株特異性較好的雜交瘤細(xì)胞;7E8E5、7E8G9、7F4B8、7F4D6和7F4H8共5株高純度單抗,均屬IgG1型,其中7E8E5效價(jià)最高,達(dá)1:512000,親和常數(shù)也最高,達(dá)4.55×108 L/mol。建立了Cd2+間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法,IC50為1150ng/mL,檢測(cè)限為260ng/mL (R2 = 0.9916);與Hg2+有較強(qiáng)交叉,與Zn2+、Cu2+、Ca2+交叉較弱,與Mg2+、Ni2+、Al3+、Pb2+、Ba2+幾乎無(wú)交叉。

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