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—— 中國食品雜志社
在確定大黃魚肌肉蛋白質雙向電泳分離的基礎上，采用熒光素- 5 -氨基硫脲（f l u o r e s c e i n - 5 -thiosemicarbazide，F(xiàn)TSC）對氧化的大黃魚肌肉蛋白質進行熒光標記和參數(shù)優(yōu)化，進而建立氧化肌肉蛋白質的雙向電泳技術體系。結果顯示，氧化肌肉蛋白質較佳的雙向電泳程序為：蛋白樣品采用液氮研磨和裂解液Ⅲ（含8 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% 3-（3-（膽酰胺丙基）二甲氨基）丙磺酸內鹽（CHAPS）、65 mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）和0.2%載體兩性電解質）制備；采用FTSC溶液40 ℃恒溫水浴3 h，對氧化蛋白質進行熒光標記，并采用乙醇-乙酸乙酯混合溶液進行洗脫；標記后的蛋白樣品采用pH 5～8的固定化pH梯度（IPG）預制膠條上樣后，采用等電聚焦程序C（50 V主動水化14 h，500 V、2 h，1 000 V、1.5 h及4 000 V、1 h三段式除鹽，6 000 V、0.5 h和10 000 V、1 h兩段式升壓，10 000 V聚焦80 000 vhr，最后500 V保持10 h）進行第1向分離，再采用12%的聚丙烯酰胺分離膠進行第2向分離；最后所得凝膠經(jīng)直接熒光掃描和銀染后掃描分別得到氧化肌肉蛋白質的熒光圖譜和肌肉全蛋白電泳圖譜。由該程序獲得的雙向電泳圖譜具有分離度好、蛋白點清晰、分布均勻等優(yōu)點，為利用雙向電泳和蛋白質組學技術分離鑒定氧化蛋白質種類、進而闡明蛋白質氧化機制提供理論依據(jù)。
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