領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為探索N-糖基化修飾對(duì)極端嗜熱酸性α-淀粉酶ApkA酶學(xué)性質(zhì)的影響，同時(shí)為構(gòu)建酵母工程菌奠定基礎(chǔ)，將ApkA缺失信號(hào)肽突變體ApkAds及含有2 個(gè)潛在N-糖基化修飾位點(diǎn)的突變體ApkAdsD182N/G373S在畢赤酵母（Pichia pastoris）GS115中進(jìn)行表達(dá)。ApkAds和ApkAdsD182N/G373S在Pichia pastoris GS115中大量表達(dá)并分泌到胞外，ApkAds的表觀分子質(zhì)量約為45 kD，ApkAdsD182N/G373S的表觀分子質(zhì)量約為55 kD。酶學(xué)性質(zhì)分析表明，與ApkAds相比，ApkAdsD182N/G373S的酶學(xué)性質(zhì)發(fā)生了一定的變化。其最適反應(yīng)pH值由6.5降低至5.5～6.0，酸性條件下穩(wěn)定性增強(qiáng)；最適反應(yīng)溫度由90 ℃提高至100 ℃；于90 ℃的半衰期由5 h增加至5.5 h，于100 ℃保溫10 min后的相對(duì)酶活力由32.03%增加至49.04%。結(jié)果表明N-糖基化修飾可適當(dāng)提高ApkA的酸性條件下酶活力和穩(wěn)定性、最適反應(yīng)溫度、熱穩(wěn)定性。突變體ApkAdsD182N/G373S的酶學(xué)性質(zhì)使其適于淀粉液化工藝的應(yīng)用。
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