領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為提高地衣芽孢桿菌L-天冬酰胺酶活性，通過定向進(jìn)化技術(shù)對其進(jìn)行分子改造。經(jīng)過兩輪易錯聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和一輪DNA shuffling，從19100多個突變株中篩選到突變體S10、S16和S21，其酶比活力較野生型分別提高了106%、74%和43%，且突變酶Kcat/Km都有所增大。其中，突變體S10氨基酸序列發(fā)生3?個突變，K43E、N67S和I269L。三維模擬結(jié)果顯示，第43位氨基酸突變?yōu)楣劝彼帷⒌?7位氨基酸突變?yōu)榻z氨酸，可能提高了底物親和力和催化效率，從而提高酶活性。圓二色譜分析表明，相比野生酶，突變酶的α-螺旋數(shù)減少、無規(guī)則卷曲有所增加，表明其剛性略有降低，柔性有所增加。利用定向進(jìn)化策略能夠有效地提高地衣芽孢桿菌L-天冬酰胺酶活性。
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