領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為快速篩選獲得具有抗炎活性的益生菌，構(gòu)建一種雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)篩選方法。將含有核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）響應(yīng)元件的雙熒光素酶質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞，通過(guò)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件以及脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)濃度等條件，建立篩選系統(tǒng)。采用該系統(tǒng)對(duì)篩選得到的86 株菌株抗炎活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)采用巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥模型進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明，最佳轉(zhuǎn)染條件為：pNF-κB-luc質(zhì)粒與pRL-TK質(zhì)粒比50∶1、質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑比1∶1、轉(zhuǎn)染時(shí)間24 h、LPS誘導(dǎo)質(zhì)量濃度100 ng/mL。對(duì)比結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)建立的雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)具有可靠性（Z’＝0.663 2）與穩(wěn)定性（R2＝0.746 99），菌株篩選結(jié)果與RAW264.7炎癥模型篩選結(jié)果一致。通過(guò)本方法最終獲得植物乳植桿菌X30、發(fā)酵粘液乳桿菌X58與融合魏斯氏菌X83共3 株具有良好抗炎活性的菌株，可有效抑制NF-κB通路的激活，顯著降低白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1β、腫瘤壞死因子-α、NF-κB p65炎癥因子的表達(dá)，提高IL-10的表達(dá)。本系統(tǒng)為靶向篩選具有抗炎活性的益生菌提供了新思路。
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