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—— 中國食品雜志社
為實現(xiàn)酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸，首先化學合成來源于紫衫（Taxus chinensis）的苯丙氨酸變位酶（phenylalanine aminomutase，PAM）基因（Tcpam），構(gòu)建大腸桿菌重組質(zhì)粒Pet-sumo-Tcpam，轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進行異源誘導表達，采用鎳柱親和層析制備電泳純的重組酶TcPAM，用于催化合成R-β-苯丙氨酸。結(jié)果表明：重組質(zhì)粒Pet-sumo-Tcpam成功在大腸桿菌中實現(xiàn)高效表達，獲得可溶性的重組TcPAM，經(jīng)過親和層析制備出電泳純的重組TcPAM。質(zhì)譜和圓二色譜檢測分析結(jié)果表明，TcPAM能夠催化α-苯丙氨酸異構(gòu)化為R構(gòu)型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最適溫度30 ℃、pH 9的條件下，酶活力達到4.11 U/mg，金屬離子K＋、Fe2＋和Ca2＋對TcPAM的活性影響較小，而Cu2＋和Zn2＋有強烈抑制性，表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基硫酸鈉、Triton X-100和Tween 80對重組酶活力影響較小，相對酶活力保持在90%以上。進一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸異構(gòu)合成β-芳香丙氨酸，結(jié)果表明：苯環(huán)上攜帶不同基團的α-芳香丙氨酸為底物時，苯環(huán)上攜帶供電子基團比吸電子基團的底物轉(zhuǎn)化率更高，底物的α-氨基容易轉(zhuǎn)移至β位，其中4-MeO-β-苯丙氨酸的產(chǎn)率最高，達到45%，為建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了參考。
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