領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為探究磷脂酶A1輔助蛋白（phospholipase A1 accessory protein，PlaS）對(duì)磷脂酶A1（phospholipase A1，PlaA1）酶活關(guān)鍵調(diào)控區(qū)域，根據(jù)PlaS的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)出截短突變體，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)將PlaA1與PlaS共表達(dá)基因plaB中編碼輔助蛋白的基因plaS進(jìn)行了剪接，并對(duì)各截短菌株進(jìn)行酶活檢測(cè)和酶學(xué)性質(zhì)分析。結(jié)果表明：PlaS屬于錨蛋白（ankyrin，ANK）家族，主要由N端域、ANK結(jié)構(gòu)域、C端域三部分組成，其中ANK結(jié)構(gòu)域包含4 個(gè)典型的ANK重復(fù)序列（ANK repeat）。從構(gòu)建的5 株截短菌株中篩選出了2 株胞外酶活相對(duì)較高的菌株AN-3與AN-4，與未截短菌株BP28相比，比酶活分別提高了73%和78%，催化效率（Kcat/Km）分別提高了216%和211%，而最適溫度（45 ℃）和最適pH值（6.0）沒(méi)有發(fā)生變化。Kcat/Km的結(jié)果顯示，在所有的截短菌株中AN菌株的催化效率最低。plaS剪接結(jié)果表明，PlaS的ANK結(jié)構(gòu)域至少需要3 個(gè)ANK repeat才會(huì)對(duì)PlaA1酶活表現(xiàn)為胞外促進(jìn)作用，PlaS的C端域?qū)S持PlaA1的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性起到重要的作用，研究為揭示PlaS對(duì)PlaA1的調(diào)控機(jī)制提供了理論基礎(chǔ)。
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