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—— 中國食品雜志社
目的:本研究從病毒富集和核酸提取兩方面進行探索,旨在建立一個反轉(zhuǎn)錄(RT)PCR技術檢測貝類中諾沃克樣病毒(NLVs)的方法。方法:利用脊髓灰質(zhì)炎病毒作為參照毒株,優(yōu)化了甘氨酸緩沖液-聚乙二醇(PEG)病毒濃縮方法;同時比較了異硫氰酸胍法、SDS-蛋白酶K法、Trizol-異丙醇法、試劑盒法四種RNA提取方法;對市售貝類樣品進行了檢測,并利用基因測序?qū)﹃栃詷悠愤M行驗證。結(jié)果:本研究采用的pH9.5甘氨酸緩沖液-16%聚乙二醇病毒濃縮法,病毒的回收率為16.8%,利用Trizol-異丙醇法提取RNA,檢出限為8.1×102RT-PCR50/5g貝肉,實際檢測貝類樣品25件,其中3件樣品為陽性,基因測序結(jié)果亦證實為陽性。結(jié)論:本研究建立了一個靈敏度較高、較為有效的RT-PCR技術檢測貝類中諾沃克樣病毒的方法。
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